GMP級別Cas9蛋白
金斯瑞提供RUO級別到GMP級別高編輯效率的Cas9蛋白產品，包括野生型和低脫靶突變型，全力支持客戶在新藥開發過程中藥物研發、臨床研究、商業化生產等不同階段的基因編輯應用。金斯瑞GMP級Cas9蛋白產品嚴格遵循GMP質量管控及生產指導原則，分析方法符合中美藥典要求。嚴格的工藝和質量控制、完善的可追溯文件體系、以及全面的技術支持，加速您的新藥開發及申報進程！
產品特點
*注： 如果您對GMP級別Cas9蛋白產品穩定性數據感興趣，請聯系我們。
產品生產標準
| 檢測項 | GMP級別 | RUO級別 |
|---|---|---|
| 廠房設施 | GMP compliant | Non-GMP |
| cGMP 指導原則 | +++ | + |
| ISO 9001質量體系 | / | +++ |
| 質量控制 | +++ | + |
| 文件體系 | +++ | + |
*注： 金斯瑞可以提供在ISO 13485質量體系下定制化Cas9蛋白產品，如有需要請聯系我們。
產品放行標準
| 檢測項 | GMP級別 | RUO級別 |
|---|---|---|
| 濃度 | 10.0 mg/mL±10% | 10.0 mg/mL±10% |
| 外觀 | 澄清，無色液體 | 澄清，無色液體 |
| 純度（SDS-PAGE） | ≥ 95 % | ≥ 95 % |
| 純度（SEC-HPLC） | ≥ 95 % | ≥ 90 % |
| 活性 | ≥ 90 % (野生型) | ≥ 90 % (野生型) |
| ≥ 85 % (突變型) | ≥ 85 % (突變型) | |
| 內毒素 | < 10 EU/mg | < 10 EU/mg |
| DNase殘留 | ≤ 10 ng/mg | 未檢出 |
| RNase殘留 | ≤ 1 ng/mg | 未檢出 |
| HCP殘留 | ＜10 ng/mg | / |
| HCDNA殘留 | ≤ 1 ng/mg | / |
| 支原體 | < LOD | / |
| 無菌 | 無菌 | / |
應用案例
圖1: 不同級別Cas9蛋白在原代T細胞的TRAC基因敲除實驗的基因敲除效率分析。分別使用RUO級別和GMP級別的野生型和突變型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA ，通過電轉方式對人原代T細胞進行TRAC基因敲除實驗。該結果表明GMP級別的Cas9蛋白在T細胞的TRAC位點敲除實驗中，與RUO級別Cas0蛋白產品擁有高度一致的基因敲除效率，敲除效率均為95%以上。隨著開發項目逐漸向臨床階段推進，可以較快的從RUO級別Cas9蛋白產品轉換到GMP級別Cas9蛋白產品。
本次實驗體系：
| 參數 | 數值 |
|---|---|
| Cas9蛋白用量 | ~4 μg |
| Cas9: sgRNA (摩爾比) | 1:2 |
| RNP投入量 | ~25 pmol |
| 細胞數 | 1.0 × 106 |
| 反應體積 | 20 μl |
圖2：GMP級別Cas9蛋白在不同規模電轉體系中的基因編輯效率分析。使用GMP級別的野生型和突變型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通過電轉方式分別在20 μl和100 μl反應體系中對人原代T細胞進行TRAC基因敲除實驗。該結果表明GMP級別的Cas9蛋白在兩個反應體系中擁有高度一致的基因敲除效率，敲除效率均為95%以上。
本次實驗體系：
| 參數 | 數值 | |
|---|---|---|
| 轉染體系 | 20 μl | 100 μl |
| Cas9 蛋白用量 | ~4 μg | ~20 μg |
| Cas9: sgRNA (摩爾比) | 1:2 | 1:2 |
| RNP 投入量 | ~25 pmol | ~125 pmol |
| 細胞數 | 1.0 × 106 | 5.0 × 106 |
圖3：GMP級別突變型Cas9蛋白在原代T細胞基因編輯效率和脫靶率分析。使用金斯瑞GMP級別的野生型和突變型Cas9蛋白及競品野生型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通過電轉方式在人原代T細胞系中進行TRAC及GM-CSF基因敲除實驗。該結果表明金斯瑞提供的GMP級別突變型Cas9與野生型Cas9蛋白在原代T細胞不同靶位點上均有相似的基因敲除效率，并表現出比野生型更低的脫靶效率。
本次實驗體系：
| 參數 | 數值 | |
|---|---|---|
| 靶點 | TRAC | GM-CSF |
| Cas9蛋白用量 | ~1.2 μg | ~4 μg |
| Cas9: sgRNA (摩爾比) | 1:3 | 1:2 |
| RNP投入量 | ~7.5 pmol | ~25 pmol |
| 細胞數 | 2.0 × 105 | 1.0 × 106 |
| 反應體積 | 10 μl | 20 μl |
圖4：GMP級別Cas9在原代T細胞中TRAC基因中敲入GFP基因的效率分析。使用GMP級別的野生型和突變型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通過電轉方式在人原代T細胞TRAC基因位點進行原位敲入實驗。該結果表明GMP級別的Cas9蛋白在原代T細胞中有高基因敲入效率。
本次實驗體系：
| 參數 | 數值 |
|---|---|
| Cas9蛋白用量 | ~4 μg |
| Cas9: sgRNA (摩爾比) | 1:2 |
| RNP投入量 | ~25 pmol |
| 細胞數 | 1.0 × 106 |
| HDR Donor | 2 μg |
| 反應體積 | 20 μl |
