產品簡介
慢病毒載體是在 HIV-1 病毒基礎上改造而生成的病毒載體系統，可以高效地將目的基因轉入到相關的細胞中。 對于HIV-1 衍生的慢病毒載體，常用酶聯免疫吸附測定法（ELISA）檢測載體樣本中的 p24蛋白從而進行物理滴度的檢測。
金斯瑞慢病毒滴度p24 ELISA試劑盒擁有超寬檢測范圍，為31.25到2000 pg/ml?？梢杂行p小稀釋倍數，從而節約檢測時間以及減少稀釋過程導致的偏差。而且金斯瑞慢病毒滴度p24 ELISA試劑盒僅需2.5小時即可完成測試，100%能在1天內完成樣本的多次測試。
產品特點
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超寬線性范圍
擁有31.25 到 2,000 pg/ml的超寬檢測線性范圍，有效減少稀釋倍數。
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極短檢測時間
僅需1小時40分鐘即可完成孵育，全程檢測用時不到3小時，不再等待。
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高檢測精密度
產品批內差≤ 10%，批間差 ≤ 15%，保證滴度測定精密度。
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靈活配置
8孔x12條，提供96次檢測，可拆卸板條，靈活取用，隨取隨用。
檢測原理
金斯瑞慢病毒滴度p24 ELISA試劑盒利用了兩種抗HIV-1病毒p24蛋白的單克隆抗體，它們可與 p24 蛋白的不同表位結合。當標準品或樣品加入捕獲板時，p24衣殼蛋白可以被包被在捕獲板上的抗p24捕獲抗體捕獲。然后在體系中加入與生物素結合的抗p24檢測抗體，該檢測抗體可以與捕獲板上結合的 p24 蛋白相互作用。隨后添加的鏈霉親和素-辣根過氧化物酶偶聯物 (Streptavidin-HRP) 可與生物素偶聯的抗 p24 抗體 (Biotin Anti-p24 Antibody) 相互作用。在洗滌步驟后，加入 3,3‘,5,5’-四甲基聯苯胺溶液（TMB溶液），可在體系中形成藍色復合物。通過添加終止溶液終止反應。終止溶液可使的體系顏色從藍色變為黃色。顏色的強度可以通過酶標儀在 450 nm 處讀取。測試樣品中p24蛋白的濃度可根據 p24蛋白標準曲線實現精確定量。最后可通過p24蛋白濃度和慢病毒滴度換算關系計算得出樣品中的慢病毒滴度。
Figure 1: 慢病毒滴度p24 ELISA試劑盒檢測原理
驗證數據
回收率用于確定分析物檢測是否受樣品基質差異的影響，通過將已知量的分析物加標到不同的樣品基質中來驗證回收率。以下是根據具有代表性的準確度驗證生成的報告和數據示例，在這項驗證中，使用3批次試劑盒（Cat. No. L00938, GenScript），將已知量的分析物加標到基質中混合驗證回收率，樣本重復測量3次。根據性能評估結果，回收率應在80%-120%，則認為樣品基質對準確定量分析物的能力影響較小。
Table 1: 三批次試劑盒回收率測試結果
| 批次編號 | 重復次數 | 平均測值 pg/mL | 回收率 | |
|---|---|---|---|---|
| 實測 | 標準: 80%-120% | |||
| #1 | 3 | 1945.30 | 86% | 符合 |
| #2 | 3 | 1787.64 | 108% | 符合 |
| #3 | 3 | 1752.76 | 90% | 符合 |
A. 批內精密度/重復性
批內精密度驗證體現測定板內每孔之間的重復性，有助于確保在測定板的不同孔中運行樣本檢測可以給出可靠的結果。 以下是根據具有代表性的批內精密度驗證生成的報告和數據示例，在這項驗證中，使用試劑盒（Cat. No. L00938, GenScript）分別對低、中、高3個濃度水平的樣本進行測試，每個樣本各重復檢測10次，每個樣本計算10次測量濃度結果的平均值（M）和標準差（SD），計算變異系數(CV)。根據性能評估結果，所測結果 %CV應低于10%，表明該測定具有良好的重復性。
Table 2: 三批次試劑盒批內精密度驗證結果
| 批次編號 | 重復次數 | 平均測值 pg/mL | %CV | |
|---|---|---|---|---|
| 實測 | 標準：≤10% | |||
| #1 | 10 | 215.55 | 3% | 符合 |
| #1 | 10 | 829.45 | 4% | 符合 |
| #1 | 10 | 1537.42 | 4% | 符合 |
| #2 | 10 | 209.60 | 5% | 符合 |
| #2 | 10 | 792.76 | 2% | 符合 |
| #2 | 10 | 1431.42 | 3% | 符合 |
| #3 | 10 | 188.09 | 6% | 符合 |
| #3 | 10 | 759.99 | 4% | 符合 |
| #3 | 10 | 1377.71 | 3% | 符合 |
B. 批間精密度
批間精密度體現同一樣品在多批測定間的重現性，有助于確保在不同批次試劑盒中運行樣本檢測可以給出可靠的結果。 以下是根據具有代表性的批間精密度驗證生成的報告和數據示例，在這項驗證中，使用3個不同批次試劑盒（Cat. No. L00938, GenScript）分別對低、中、高3個濃度水平的樣本進行測試，每個樣本各重復檢測10次，每個樣本計算30次測量濃度結果的平均值（M）和標準差（SD），計算變異系數(CV)。根據性能評估結果，所測結果 %CV應低于15%，表明該測定具有良好的批間精密度。
Table 3: 三批次試劑盒批間差驗證結果
| 批次數量 | 重復次數 | 平均測值 pg/mL | %CV | |
|---|---|---|---|---|
| 實測 | 標準：≤15% | |||
| 3 | 3×10 | 204.41 | 7% | 符合 |
| 3 | 3×10 | 794.07 | 5% | 符合 |
| 3 | 3×10 | 1448.85 | 6% | 符合 |
使用慢病毒滴度p24試劑盒對慢病毒純化生產全流程進行慢病毒滴度監測，有利于慢病毒純化和成產過程控制和優化。金斯瑞慢病毒滴度p24試劑盒（Cat. No. L00938, GenScript）的超寬線性可以有效減小稀釋倍數，從而節約檢測時間以及減少稀釋過程導致的偏差。
Table 4a: 金斯瑞慢病毒滴度p24試劑盒在慢病毒純化生產全流程的滴度檢測
| 樣品名稱 | 樣品OD值 | 樣品檢測值 (pg/mL) | 稀釋倍數 | p24濃度 (LP/mL) | CV % |
|---|---|---|---|---|---|
| HM上清液 | 3.151 | 2445.918 | 100 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 1.225 | 444.343 | 3000 | 1.67E+10 | ||
| PB核酸酶孵育 | 3.12 | 2369.055 | 100 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 1.242 | 451.997 | 3000 | 1.69E+10 | ||
| Centrifugation離心 | 3.103 | 2328.92 | 100 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 0.94 | 321.172 | 3000 | 1.20E+10 | ||
| CF-01澄清過濾 | 3.136 | 2405.64 | 100 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 0.926 | 315.765 | 3000 | 1.18E+10 | ||
| UF/DF濃縮換液 | 2.183 | 1040.264 | 3000 | 3.90E+10 | 3 |
| 0.152 | 36.234 | 90000 | 4.08E+10 | ||
| CF-02澄清過濾 | 1.994 | 890.168 | 3000 | 3.34E+10 | 6 |
| 0.142 | 32.441 | 90000 | 3.65E+10 | ||
| GF凝膠過濾 | 1.496 | 578.496 | 3000 | 2.17E+10 | / |
| 0.106 | 18.902 | 90000 | 超出檢測范圍，無效 | ||
| UF/DF-02濃縮換液 | 2.623 | 1501.37 | 3000 | 5.63E+10 | 3 |
| 0.185 | 47.906 | 90000 | 5.39E+10 | ||
| 最終樣 | 3.155 | 2459.286 | 3000 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 0.799 | 265.916 | 90000 | 2.99E+11 |
Table 4b: 競品慢病毒滴度p24試劑盒在慢病毒純化生產全流程的滴度檢測
| 樣品名稱 | 樣品檢測值 (pg/mL) | 樣品OD值 | 稀釋倍數 | p24濃度 (LP/mL) | CV % |
|---|---|---|---|---|---|
| HM上清液 | 86.687 | 1.223 | 12000 | 1.30E+10 | / |
| 291.899 | 3.143 | 2000 | 超出檢測范圍，無效 | ||
| PB核酸酶孵育 | 100.254 | 1.375 | 12000 | 1.50E+10 | / |
| 282.872 | 3.073 | 2000 | 超出檢測范圍，無效 | ||
| Centrifugation離心 | 73.79 | 1.073 | 12000 | 1.11E+10 | / |
| 275.974 | 3.019 | 2000 | 超出檢測范圍，無效 | ||
| CF-01澄清過濾 | 69.953 | 1.028 | 12000 | 1.05E+10 | / |
| 279.996 | 3.051 | 2000 | 超出檢測范圍，無效 | ||
| UF/DF濃縮換液 | 234.108 | 2.675 | 10000 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 39.453 | 0.653 | 60000 | 2.96E+10 | ||
| CF-02澄清過濾 | 212.127 | 2.484 | 10000 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 36.317 | 0.612 | 60000 | 2.72E+10 | ||
| GF凝膠過濾 | 165.17 | 2.048 | 10000 | 2.06E+10 | 5 |
| 29.342 | 0.522 | 60000 | 2.20E+10 | ||
| UF/DF-02濃縮換液 | 275.001 | 3.011 | 10000 | 超出檢測范圍，無效 | / |
| 69.346 | 1.021 | 60000 | 5.20E+10 | ||
| 最終樣 | 38.46 | 0.64 | 480000 | 2.31E+11 | / |
| 244.786 | 2.765 | 80000 | 超出檢測范圍，無效 |
* 紅色標記數據為超出檢測范圍數據
在慢病毒純化生產的工藝開發過程中，9個工藝過程的18個樣品被采集并進行滴度檢測。實驗結果發現： 1. 金斯瑞慢病毒滴度p24檢測試劑盒的稀釋倍數低于用競品的p24檢測試劑盒的稀釋倍數。 2. 在稀釋慢病毒到慢病毒滴度p24檢測試劑盒的線性范圍的過程中，18個樣品使用金斯瑞慢病毒滴度p24檢測試劑盒一次稀釋成功率為 67%，而使用競品p24檢測試劑盒一次稀釋成功率為 56%。
